Alla ricerca del virus HIV

From: Subject: Alla ricerca del virus HIV Date: Tue, 27 Apr 2010 23:01:55 +0200 MIME-Version: 1.0 Content-Type: multipart/related; type="text/html"; boundary="----=_NextPart_000_0000_01CAE65D.A1CA30D0" X-MimeOLE: Produced By Microsoft MimeOLE V6.00.2900.5579 This is a multi-part message in MIME format. ------=_NextPart_000_0000_01CAE65D.A1CA30D0 Content-Type: text/html; charset="iso-8859-1" Content-Transfer-Encoding: quoted-printable Content-Location: http://www.cesil.com/0898/itfrah08.htm Alla ricerca del virus HIV .........

=20

Fabio Franchi =20

Abstract

=20 Curriculum =20 Bibliografia

Compito del ricercatore =E8 = cercare di=20 falsificare quante pi=F9 teorie =E8=20 possibile. =20

Karl=20 Popper

C'=E8 forse un pericolo nella = biologia=20 molecolare, ovvero che l'accumulo di dati si spinger=E0 cos=EC = oltre alla sua=20 assimilazione in una struttura concettuale, che i dati = risulteranno=20 infine d'impaccio? Parte della preoccupazione =E8 che = l'eccitamento della=20 caccia lascia poco spazio alla riflessione. E ci sono fondi per = produrre=20 dati, ma a stento per fermarsi in=20 meditazione. =20

= John Maddox = (1)

Secondo la teoria=20 infettiva dell=92AIDS, l=92infezione da HIV =E8 attiva fin dalle = prime fasi e=20 molto difficilmente pu=F2 essere eliminata dall=92organismo nel = corso degli=20 anni. La sua presenza =E8 segnalata da appositi test. Quelli = attualmente a=20 disposizione sono fondamentali non solamente per la diagnosi , ma = vengono=20 utilizzati come elementi indicativi ai fini prognostici e=20 terapeutici.
Poich=E9 la scienza=20 per definizione =E8 aperta ad ogni controllo ed ogni sua = affermazione deve=20 poter essere dimostrata in base a regole logiche, il presente = studio si=20 pone l=92obiettivo di verificare se vi sia corrispondenza tra i = diversi=20 =93test per l=92AIDS=94 ed il significato a loro attribuito. = Verranno esaminati=20 i principali: quelli anticorpali (ELISA e Western Blot e p24),=20 l=92identificazione del virus tramite la coltura, = l=92identificazione degli=20 acidi nucleici, la sua caratterizzazione genica, le metodiche=20 d=92isolamento, le fotografie del = virus. =20
Verr=E0=20 analizzato e criticato il procedimento seguito attualmente, come=20 presentato in testi specialistici aggiornati, tra questi =93AIDS, = Biology,=20 Diagnosis, Treatment and Prevention=94 edito nel 1997, di cui un = autore =E8 A.=20 Fauci, ex direttore del National Institute of=20 Health.
Ci siamo posti in altre parole = l=92obiettivo di=20 rispondere alla domanda cruciale come l=92avrebbe formulata il = grande=20 clinico e studioso di metodologia della scienza prof. = Augusto Murri:=20 =93Perch=E9 devo io credere che il significato dei test = dell=92AIDS corrisponda=20 a un=92infezione con il virus HIV?=94 Egli considerava = indispensabile avere,=20 nella vita come nella professione, un=92abitudine, quella di = criticare prima=20 di accettare una informazione. =20

ANALISI=20 DEI TEST ANTICORPALI
I = test anticorpali=20 esaminati saranno l=92ELISA, il Western Blot, il test di cattura=20 dell=92antigene p24.
&nb= sp; =
ELISA &nbs= p; =20 (fig. 1) =20

In Italia,=20 per identificare l=92infezione da HIV viene in prima istanza = utilizzato un=20 test di screening (ELISA), =93dotato di buona sensibilit=E0 = (vicino al 99%) e=20 minore specificit=E0, stimata attorno al 90-95% nel=20 1988=94.
Queste percentuali=20 non debbono per=F2 trarre in inganno, infatti il valore predittivo = del test=20 varia a seconda della prevalenza dell=92infezione in una = determinata=20 popolazione. Secondo un=92ipotesi formulata dalla Commissione = Nazionale AIDS=20 nel 1988 , in caso di screening della popolazione carceraria = italiana, di=20 fronte a 6.902 veripositivi si sarebbero avuti 1.751 falsi = positivi;=20 invece, nel caso dei donatori di sangue, di fronte a 198 veri = positivi,=20 ben 99.990 sarebbero stati i falsi positivi (ben 505 volte di=20 pi=F9!).
Nel libro gi=E0 citato =93AIDS=94 = , gli autori=20 sostengono che i progressivi perfezionamenti del test hanno = portato la sua=20 sensibilit=E0 al 95% e la specificit=E0 al 99,8% in popolazioni ad = alto=20 rischio,valori che non si discostano di molto dai precedenti. = Viene per=F2=20 ammesso che =93il valore predittivo positivo pu=F2 fluttuare = grandemente in=20 dipendenza della popolazione studiata=94. In realt=E0 cos=EC =E8=20 avvenuto.
Stando ad=20 informazioni pubblicate sull=92autorevole rivista medica inglese = The Lancet,=20 nel 1990, in Russia vennero fatti 20,2 milioni di test ELISA, di = cui=20 20.000 risultarono positivi, ma solo 112 vennero confermati con il = WB; nel=20 1991, su 30 milioni di test ELISA, ben 30.000 risultarono = positivi, ma di=20 questi solo 66 risultarono confermati dal Western Blot, cio=E8 una = percentuale minima (0,002%).
=93Dunque il test=20 ELISA essendo stato disegnato per ottimizzare la sensibilit=E0 a = spese della=20 specificit=E0, non dovrebbe essere usato da solo per la diagnosi = di=20 infezione da HIV-1 senza un test di conferma=94, sebbene in alcune = nazioni=20 sia usato da solo. =20

Il test=20 Western Blot (fig. 2) =20

Il Western=20 Blot (WB) viene comunemente usato come un test di conferma = dell=92infezione=20 da HIV; la combinazione dell=92ELISA e del WB vanta ufficialmente = =93un valore=20 predittivo positivo maggiore del 99% per popolazioni a basso = rischio e ad=20 alto rischio=94.
Tuttavia neanche il=20 WB appare cos=EC specifico come sostenuto se vengono analizzati = alcuni dati=20 a disposizione.
a) = Viene=20 riconosciuto persino da fonti ufficiali che =93=E8 stato molto = difficile =20 codificare la definizione su ci=F2 che dovrebbe essere considerato = un=20 Western Blot positivo, a causa di discreti=20 disaccordi=94.
Fino = al 1993, negli=20 Stati Uniti vi erano ben 5 criteri ufficiali, e solo uno (indicato = nel kit=20 diagnostico della Du Pont) era stato approvato dalla FDA (Food and = Drug=20 Administration). Questo era il pi=F9 restrittivo ed era usato da = pochi=20 laboratori.
Se = fosse stato=20 usato unicamente questo criterio, ben il 50% dei sieropositivi = negli Stati=20 Uniti sarebbero stati considerati come non=20 infetti!
In = Italia, in una=20 pubblicazione del Ministero della Sanit=E0 rivolta ai medici di = famiglia ,=20 veniva negato che una questione del genere potesse costituire un = problema.=20 Al proposito si affermava: =93nella grande maggioranza dei=20 casi,indipendentemente dal criterio utilizzato, il test risulta=20 correttamente classificato positivo quando l=92individuo =E8 = infetto=94. Il=20 fatto che i risultati potevano essere ben diversi non veniva = neppure=20 menzionato.
A = tale situazione=20 il rimedio =E8 stato trovato semplicemente uniformando i diversi = criteri=20 senza riconsiderare il passato e senza chiarire i motivi = scientifici per=20 cui cos=EC si =E8 optato.
"I = CDC hanno in un=20 secondo tempo identificato i propri con quelli del ASTPHLD e nel = 1993 la=20 Croce Rossa statunitense si =E8 adeguata adottando le = raccomandazioni del=20 ASTPHLD/CDC=94. =93Secondo l=92ente americano ASTPHLD, un = risultato positivo=20 deve presentare almeno due delle tre bande maggiori di significato = diagnostico (anti-gp41, anti-gp120/160,=20 anti-p24)=94.
b) La = lettura del=20 WB =E8 visiva ed =E8 soggetta perci=F2 ad interpretazione da parte = dell=92operatore, un fattore di variabilit=E0 non trascurabile. = =93La sua=20 tecnica (ndr: del Western Blot) non =E8 stata standardizzata, = l=92importanza e=20 le conseguenze delle variazioni verificatesi nei laboratori non = sono=20 ancora state misurate. I suoi risultati richiedono d=92essere = interpretati;=20 i criteri per queste interpretazioni variano non solo da = laboratorio a=20 laboratorio, ma anche di mese in = mese=94. =20
Il=20 Consorzio statunitense per la Standardizzazione della Sierologia=20 Retrovirale (CRSS) ha effettuato un controllo di qualit=E0 = inviando 19 quote=20 dello stesso siero a 19 laboratori di riferimento ed il confronto = dei=20 risultati ha dimostrato una strabiliante differenza del numero di = bande e=20 della loro intensit=E0 nelle diverse =93striscie=94 (fig.=20 3).
Le preparazioni antigeniche non = sono=20 purificate.
=93La = presenza di=20 bande in posizioni non corrispondenti a noti antigeni virali =E8 = un=20 ritrovamento piuttosto comune e si presume sia la=20 = conse           &n= bsp;  =20 guenza di contaminanti nella preparazione ...=94. =93Il peso = molecolare di=20 queste bande aberranti pu=F2 variare da ditta a ditta o = persino da=20 lotto a lotto della medesima ditta=20 produttrice=94.
Ecco = il commento di=20 Zolla-Pazner nel 1989: =93Confusione sulla=20 = identi           &= nbsp;  =20 ficazione di queste bande (n.d.r.: i risultati del test Western=20 = Blot)            = =E8=20 risultata in conclusioni scorrette negli studi sperimentali. [...] = potrebbe essere necessaria la reinterpretazione dei risultati = gi=E0=20 pubblicati=94.
Questa auspicata=20 reinterpretazione non =E8 avvenuta fino al momento attuale (marzo=20 1998).
d) Bande considerate = =93specifiche=94 non indicano=20 in molti casi un=92infezione da HIV. Seguono alcuni=20 esempi.
- Pur utilizzando i criteri pi=F9 = restrittivi,=20 Lundberg osserv=F2 che ben il 10% dei sieri di controllo, che = includevano=20 campioni di sangue dalle banche del sangue, avevano un WB=20 positivo. =20

- In uno=20 studio, si rilevava che dal 2 al 49% dei pazienti testati potevano = avere=20 una reattivit=E0 al WB (WB indeterminato), pi=F9 frequentemente = causata da=20 anticorpi cross-reagenti.
- = Anche una=20 semplice vaccinazione anti-influenzale pu=F2 rendere positivo il=20 risultato.
- Anche la trasfusione del proprio = sangue=20 irradiato produce gli stessi anticorpi. =
- Tra gli=20 omosessuali o bisessuali che risultano negativi per l=92ELISA e la = PCR,=20 20%-30% possono avere una o pi=F9 bande presenti sul Western=20 Blot.
- Dati ancora pi=F9 sconcertanti = riguardano uno=20 studio effettuato su dei cani e pubblicato nel 1990. Scrivendo su = Cancer=20 Research, Strandstrom e colleghi riportarono che 72 su 144 (50%) = campioni=20 di sangue canino ottenuti dall' Ospedale Veterinario = dell=92Universit=E0 di=20 California, e testati con il Western Blot reagivano con una o = pi=F9 proteine=20 ricombinanti dell=92HIV [gp120--21.5%, gp41--23%, p31--22%,=20 p24--43%]=93.
Poich=E9 gli Autori=20 considerano i cani non infetti con l=92HIV, si deve concludere che = questi=20 dati sono una ulteriore prova della frequente cross reattivit=E0 = anticorpale=20 con molte =93proteine diverse da quelle=20 dell=92HIV=94.
E' = importante, a=20 questo punto, introdurre alcune = considerazioni. =20
Il fatto=20 che le bande siano definite non specifiche se ritrovate = singolarmente, ma=20 specifiche per il virus se presenti in numero di due o pi=F9 di = due, appare=20 rifarsi non a considerazioni di ordine biologico, ma ad una = convenzione,=20 ad un accordo di tipo =93legale=94, variabile nel tempo e nello = spazio=20 (infatti =E8 differente nelle diverse=20 nazioni).
Secondo una=20 convenzione che era accettata fino a non molto tempo fa da molti = autori,=20 tre bande nel WB di un donatore di sangue clinicamente sano erano=20 considerate false reazioni = positive.  =20
Secondo=20 la medesima convenzione, le tre bande dello stesso donatore di = sangue,=20 questa volta presentate ad una Societ=E0 di Assicurazione per una = polizza=20 sulla vita, sarebbero state considerate vere =20 positive!
Il = gruppo di=20 ricercatori di Perth che ha analizzato a fondo il significato = del =20 WB, ha concluso che le proteine considerate virali non sono = peculiari del=20 virus HIV e sono indistinguibili da proteine di origine=20 cellulare.
In = particolare,=20 secondo lo studio finora non confutato della Eleopulos e coll. , = la gp 41=20 corrisponderebbe all=92actina; la p18 e la p24/25 alle due = subunit=E0=20 della miosina (la p24 =E8 la banda aspecifica ritrovata con = maggior=20 frequenza in soggetti =93non infetti=94); la p32 sarebbe identica = alla catena=20 beta dell=92antigene DR della classe di istocompatibilit=E0 II; la = gp120-160=20 non sarebbero nient=92altro che oligomeri della=20 gp41. =20

Antigene=20 p24 =20

La=20 valutazione del test di cattura dell=92antigene p24 =E8 stato = compreso in USA=20 tra i test che vengono effettuati ad ogni unit=E0 di sangue (e = considerato=20 come =93diretta evidenza del virus = HIV=94). =20
Secondo=20 Fauci e coll. , viene ritenuto = che: =20
a) la p24=20 corrisponde all=92antigene del capside virale (core) che viene = evidenziato=20 da un siero contenente i relativi anticorpi monoclonali (anti-p24) = associati ad un sistema rivelatore; =
b) il = test comunque=20 non =E8 utile come mezzo di screening primario nello stabilire una = diagnosi=20 precoce di infezione da HIV;
c) = l=92aumentare del=20 livello della p24 presumibilmente correla con l=92esplosione nella = replicazione virale, rilevabili con altri metodi come la viremia=20 plasmatica;
d) il = livello di=20 p24 usualmente cade sotto la soglia di determinazione con metodi=20 convenzionali come l=92anticorpo anti-p24, comincia a formarsi = durante la=20 sieroconversione e pu=F2 rimanere in quello stato durante i = seguenti anni di=20 infezione asintomatica. Solamente il 20-30% di individui con = infezione=20 asintomatica ha livelli rilevabili di p24=20 sierico.
Tuttavia le perplessit=E0 sul suo = reale=20 significato sono molteplici.   =
Dati = quantitativi=20 indicano che in pazienti sieropositivi possono essere ritrovati 50 = pg e=20 talvolta pi=F9 di proteina del core, la=20 p24.
Se un retrovirus pesa 10 -3pg e = met=E0 del suo=20 peso =E8 costituita da p24   15, questa quantit=E0 = corrisponde=20 allora a circa=20 = 100.000           =             &= nbsp;      =20 particelle virali; secondo altri autori e secondo altre premesse=20 addirittura a 500.000 particelle!   =
Dunque,=20 se tutta questa proteina venisse dai virioni, questi pazienti = dovrebbero=20 essere altamente viremici.   =
In = altre parole vi=20 dovrebbe essere una corrispondenza diretta tra livelli di p24, = =93isolamento=20 virale=94, livelli di =93RNA virale=94 (detta anche =93carica = virale=94). Invece=20 cos=EC non =E8. I risultati sono irrimediabilmente differenti da = quelli che=20 logicamente sarebbero attesi.   =
Per = esempio, un=20 lavoro riporta la presenza di antigenemia ma che nessun virus = pot=E9 essere=20 isolato da 31 pazienti antigenemici, anche in seguito a = coltivazione=20 estesa.
Osservazioni analoghe sono = riportate da altri=20 studi.
Ne = vengono citati=20 alcuni:
1) = "in met=E0 dei=20 casi in cui una persona aveva un test positivo,=20 = sus           &nbs= p;  =20 seguentemente ne aveva uno negativo senza assumere alcuna = medicazione che=20 avesse potuto alterare i livelli di p24... il test =E8 = clinicamente erratico=20 e dovrebbe essere interpretato molto=20 cautamente=94.
2) = l=92antigene p24=20 non =E8 ritrovato in tutti i soggetti sieropositivi e neppure = quelli con=20 AIDS conclamato. In uno studio, la PCR (Polymerase Chain Reaction) = e la=20 p24 furono usati per scoprire l=92HIV in pazienti in vari stadi, = da=20 asintomatici ad AIDS. La p24 fu trovata nel 24% dei pazienti e = l=92HIV-RNA=20 nel 50%.
3) Oltre il 29% dei riceventi una = trasfusione=20 da soggetti sieronegativi, diventa positiva per l=92anticorpo = anti-p24, pur=20 =93in assenza di infezione=94. =
4) La = non=20 specificit=E0 del test dell=92antigene p24 =E8 cos=EC ovvia che = =E8 accettata da=20 un=92autorit=E0 riconosciuta nel campo, Philip Mortimer -e i suoi = colleghi-=20 del Public Health Laboratory Service in Inghilterra: = =93L=92esperienza ha=20 dimostrato che n=E9 la coltura virale, n=E9 i test per la p24 sono = di gran=20 valore nel test diagnostico. Essi possono essere non sensibili o = non=20 specifici=94. =20

Conclusione
           =20
I test=20 anticorpali (l=92ELISA, il Western Blot ed il test di cattura = dell=92antigene=20 p24) per i numerosi motivi sopra esposti, non sono in grado di = segnalare=20 con ragionevole sicurezza di trovarsi di fronte ad un=92infezione = con il=20 virus HIV e perci=F2 l=92asserzione che il valore predittivo = positivo del WB=20 possa essere considerato superiore al 99% non corrisponde alla=20 realt=E0.
Questi test=20 rivelano reazioni di una specificit=E0 variabile o meglio = indeterminata,=20 tanto da non poter permettere una distinzione tra cross = reattivit=E0 e=20 =93infezione da HIV=94.  =20

L'IDENTIFICAZIONE DIRETTA DEL = VIRUS =20
&nb= sp; =20
E=92 comune=20 convinzione che i test anticorpali siano stati convalidati e in = qualche=20 modo verificati da altri in grado di evidenziare il virus stesso, = test=20 capaci di identificarlo = direttamente. =20
Tuttavia,=20 questa determinazione diretta =E8 tale solo all=92apparenza. Si = limita a=20 registrare alcuni fenomeni che si crede siano legati in maniera=20 inequivocabile all=92HIV.
L=92identificazione=20 diretta del virus =E8 divisa in due principali categorie = : la=20 coltura virale e l=92identificazione diretta degli acidi nucleici = virali=20 (Southern Blot, tecniche di amplificazione come PCR, RT PCR, bDNA, = NASBA). =20

La coltura=20 virale =20

L=92isolamento virale usualmente coinvolge una = co-coltura delle=20 cellule del paziente con cellule di un donatore non infettate che = sono=20 state stimolate con fitoemoagglutinina (PHA) per 3=20 giorni.
Queste co-colture=20 sono controllate approssimativamente ogni 3 giorni per 28 giorni o = pi=F9 per=20 controllare la formazione di sincizi e la presenza di p24 o la=20 transcriptasi inversa (RT) nel sopranatante della=20 coltura.
La = presenza di=20 sincizi (a) o dell=92antigene p24 (b) o della RT (c) =E8 = considerata evidenza=20 di replicazione virale.
Secondo Gallo ed=20 altri autori anche il ritrovamento di particelle simil-virali in = coltura =E8=20 da ritenersi criterio sufficiente. =20

a)=20 Comparsa di sincizi
La = comparsa di=20 sincizi =E8 osservata solamente in una parte delle colture = considerate=20 infette, ma le stesse sono presenti anche in linee cellulari = =93non infette=94=20 e simili a quelle utilizzate per = l=92HIV. =20
Cos=EC tali=20 caratteristiche morfologiche cellulari potrebbero essere una=20 caratteristica delle stesse linee cellulari, del risultato delle=20 condizioni di coltura o di entrambi questi=20 fattori. =20

b)=20 Antigene p24
La = sua mancanza di=20 specificit=E0 =E8 gi=E0 stata menzionata. Le obiezioni al suo = utilizzo come test=20 sul siero del paziente sono valide anche per il suo utilizzo nelle = colture.
In uno studio in cui =E8 stato = utilizzato questo=20 metodo di =93isolamento virale=94 (la determinazione della p24 in = colture con=20 sangue intero non frazionato), risultati positivi sono stati = ottenuti in=20 49 su 60 =93individui=94 (82%) presumibilmente non infetti ma = sierologicamente=20 indeterminati e in 5 su 5 donatori di sangue=20 sieronegativi. =20

c)=20 Transcriptasi inversa (RT)
In = tutta la ricerca=20 sull=92HIV, =E8 considerata quale prova di attivit=E0 = transcriptasica inversa=20 dell=92HIV la capacit=E0 di copiare lo stampo-innesco = (template-primer)=20 A(n).dT<->15 quando incubato con il sopranatante o il = materiale=20 proveniente da co-colture di materiale infetto con il virus = dell=92AIDS che=20 si separa ad un livello di 1,16 gm/ml (gradiente di densit=E0 in=20 sucrosio).
In molti casi questa attivit=E0 = =E8 considerata=20 sinonimo di =93isolamento = dell=92HIV=94.
Comunque: (i) Lo=20 stesso stampo-innesco =E8 anche copiato quando incubato con = materiale che si=20 separa nella banda 1,16 mg/ml da colture di cellule leucemiche e=20 spermatozoi non infetti; ii) lo stampo-innesco A(n).dT<->15 = pu=F2=20 essere trascritto non solo dall=92RT, ma anche da altre polimerasi = cellulari=20 del DNA. Tutte le polimerasi cellulari del DNA, alfa, beta e gamma = possono=20 copiare l=92A(n).dT. Infatti, nel 1975, una Conferenza = Internazionale sulle=20 polimerasi eucariotiche del DNA che comprendeva Baltimore e Gallo, = defin=EC=20 la polimerasi gamma del DNA, =93un componente delle cellule = normali=94, la cui=20 attivit=E0 pu=F2 essere aumentata da molti fattori compresa la = stimolazione=20 del PHA, l=92enzima che =93copia=20 l=92A(n).dT<->15
con = alto=20 rendimento, ma non copia bene il = DNA=94; =20
Da quanto=20 sopra si deduce che =E8 errato affermare che tale attivit=E0 = enzimatica sia=20 peculiare dei retrovirus, tanto meno che sia indice inequivocabile = della=20 presenza del retrovirus HIV.
Le = particelle e le=20 proteine che si separano a livello della banda 1,16 mg/ml = potrebbero=20 riflettere materiale interamente non virale; sicuramente gran = parte dello=20 stesso materiale =E8 cellulare e proveniente da colture stimolate = con PHA=20 (come vedremo meglio in seguito), per cui l=92attivit=E0 = transcriptasica=20 potrebbe derivare da esso.

Oggetti con=20 l=92aspetto retrovirale
Il = ritrovamento di=20 particelle simil-retrovirali in coltura fu considerato da Gallo = prova di=20 isolamento dell=92HIV (allora HTLV-III). Tuttavia Gallo, per = isolare=20 l=92HTLV-IIIB, us=F2 la linea cellulare H9 (HUT78) e tale linea = cellulare=20 rilascia particelle simil-retrovirali anche quando =93non infetta = con=20 l=92HIV=94.
Weiss ha ottenuto il suo = =93isolato CBL-I=94 dalla=20 linea cellulare leucemica CEM, una linea cellulare che ospitava = retrovirus=20 anche quando non infettati con = l=92=93HIV=94. =20
Nel 1970,=20 tali particelle erano frequentemente osservate nei tessuti = leucemici, in=20 colture di tessuti embrionali e nella maggioranza se non in tutte = le=20 placente umane.
Particelle di tipo=20 C mature od estroflesse appaiono in cellule linfomatose = metabolicamente=20 danneggiate ma non infette con = l=92HIV.  =20
=93Particelle retrovirali=94 antigenicamente simili = all=92HIV sono state=20 trovate in estratti da colture di ghiandole salivari di pazienti = con la=20 sindrome di Sjorgen.
Pi=F9 = importante=20 ancora, nell=92unico studio di microscopia elettronica, sia in = vivo che in=20 vitro in cui furono usati adeguati controlli ed in cui fosse stato = effettuato un estensivo esame in cieco dei controlli e del = materiale del=20 test, vennero trovate =93particelle virali indistinguibili = dall=92HIV=94 in una=20 variet=E0 di linfoadenopatie reattive non associate all=92HIV, = portando gli=20 autori a concludere: =93La presenza di tali particelle non = indicano, di per=20 s=E9 stesse, un=92infezione con l=92HIV=94 (fig. = 4). =20

Conclusione
E' = inevitabile=20 convenire che n=E9 la presenza di sincizi, n=E9 il riscontro della = p24, n=E9=20 l=92attivit=E0 transcriptasica inversa, n=E9 la presenza di = particelle=20 similvirali (insomma ciascun elemento che definisce positiva una = coltura=20 dell=92HIV) sono =93evidenza di replicazione virale=94, nonostante = il=20 significato attribuito sia proprio=20 questo. =20

Identificazione diretta degli acidi=20 nucleici
Per identificazione diretta degli = acidi=20 nucleici vengono intese le tecniche del Southern Blot, la PCR, le = tecniche=20 di amplificazione quantitative (RT PCR, bDNA, NASBA). = L=92identificazione si=20 basa sul riconoscimento e l=92amplificazione di piccole sequenze=20 nucleotidiche attribuite all=92HIV, non dell=92intero genoma=20 virale.
Tale = ricerca viene=20 effettuata non su colture, ma direttamente sui tessuti (compreso = il=20 sangue) del paziente. =20

a) Tecnica=20 del Southern blot (tecnica che permette di separare ed evidenziare = acidi=20 nucleici del tipo ricercato)
Il = primo studio fu=20 condotto da Gallo nel 1984. Usando la tecnica di ibridizzazione = Southern=20 Blot (capace teoricamente di identificare una sola cellula infetta = su 10),=20 furono esaminati i tessuti di pazienti con AIDS, ma deboli bande = furono=20 ritrovate solo in una minoranza di = essi. =20

b) La PCR=20 (Reazione polimerasica a catena) =
La = sensibilit=E0=20 della PCR =E8 stimata 92-100% ed =E8 in grado di rilevare una = cellula=20 =93infetta=94 su 100.000.
Tuttavia per la sua=20 alta sensibilit=E0 =E8 altamente soggetta alla falsa positivit=E0 = a causa di=20 contaminazioni anche minime o ad altri comuni errori di=20 laboratorio.
Sequenze=20 simil-retrovirali sono rinvenibili nel genoma umano in ogni=20 cellula.
Gi=E0 nel 1991, Imagawa e Detels = fecero notare=20 una potenziale fallacia della PCR. =93La determinazione di parte = del genoma=20 - sostenevano - non significa rivelare un virus=20 completo=94.
Molto importante =E8 il problema = dei falsi=20 positivi. Molti ricercatori contestano l=92affidabilit=E0 della = PCR a causa=20 dell=92alto numero di falsi positivi che questo test produrrebbe. = La PCR non=20 si =E8 dimostrata riproducibile e falsi positivi e falsi negativi = furono=20 osservati in tutti e 7 i laboratori di riferimento coinvolti in un = importante studio francese (la concordanza con la sierologia = variava dal=20 40% al 100%). In pi=F9, il numero di risultati positivi non = differiva=20 significativamente tra i sieronegativi ad alto e a basso=20 rischio.
Vi = sono numerose=20 altre conferme a queste osservazioni: =
1) = Uno studio di=20 efficacia nel valutare le prestazioni dell=92HIV PCR = nell=92individuare DNA=20 virale libero da cellule dimostr=F2 =93un disturbante alto tasso = di positivit=E0=20 non specifica=94 usando gli inneschi comunemente utilizzati = (SK38/39, per il=20 gene della p24 o gag). In realt=E0, simili tassi di positivit=E0 = vennero=20 trovati sia per i campioni anticorpo negativi che quelli anticorpo = positivi (18% contro il 26%).
2) La = PCR (DNA-PCR=20 qualitativa) effettuata su=20 = infanti           =      =20 non infetti risult=F2 in diverse occasioni=20 positiva.
3) In uno studio di validit=E0 = della PCR=20 coordinato dal Gruppo di Lavoro sulla PCR dell=92OMS, il 54% dei = laboratori=20 coinvolti avevano problemi con risultati falsamente positivi; 9,3% = dei=20 campioni non infetti erano riportati come=20 positivi.
4) Gli autori di uno studio = multicentrico di=20 valutazione di qualit=E0, affermarono: =93questo studio ha = dimostrato che i=20 risultati falsi positivi, nonostante l=92uso di rigorosi algoritmi = procedurali, capitano tra gli individui non infetti con frequenza = tale da=20 rimanere un serio problema=94.   =
Il = riscontro di un=20 numero rilevante =93falsi positivi=94 depone per una notevole = mancanza di=20 specificit=E0 della PCR. =20

c)=20 Tecniche quantitative
Le = tecniche=20 =93quantitative=94 sarebbero in grado di calcolare, in modo = approssimativo, il=20 numero di virioni per millilitro di plasma utilizzando delle = opportune=20 modificazioni di certe tecniche di amplificazione (amplificazione = del=20 substrato, come la RT-PCR e la NASBA, o amplificazione del = segnale, come=20 la bDNA). Il substrato consiste in =93regioni conservate=94 di un = gene=20 presunto virale.
La = sensibilit=E0=20 calcolata =E8: per la RNA RT-PCR di 100 copie of HIV RNA per = millilitro di=20 = plasma &= nbsp; =20
; per la=20 NASBA di 1.000 molecole per millilitro =20
; per la=20 bDNA (branched DNA) di 10.000 molecole per=20 millilitro. =20

Fino al=20 1994 si riteneva che l=92HIV fosse presente in piccole quantit=E0 = nei tessuti=20 dei soggetti asintomatici e con AIDS e che infettasse poche = cellule (1=20 linfocita su 1.000-100.000). Nel 1995 due studi sembrarono = dimostrare=20 invece che l=92HIV si replicava molto attivamente fin dalle prime = fasi=20 dell=92infezione. Le nuove tecniche sopra menzionate permettevano=20 apparentemente di rivelare grandi quantit=E0 di virus che prima = erano=20 sfuggite all=92osservazione.
Tuttavia se negli=20 infetti vi fosse una massiccia infezione, come alcuni dei pi=F9 = conosciuti=20 esperti sostengono, l=92ibridizzazione con il Southern blot = sarebbe stata=20 pi=F9 che sufficiente per rilevarla. Non dimentichiamo che un = sorprendente=20 risultato sia con la Southern Blot standard sia con la PCR era = =93la=20 scarsit=E0 o l=92apparente assenza del DNA virale in una parte = considerevole=20 dei pazienti=94.
Un = significativo=20 lapsus freudiano di John Maddox conferma i sospetti: secondo = Maddox =93sia=20 Ho che Wei ed i loro colleghi furono in grado di arrivare alle = loro=20 allarmanti conclusioni solamente dopo una decade di ricerche = sull=92HIV=20 poich=E9 avevano studiato in =E9quipe con dei matematici e = poich=E9 essi furono=20 in grado di usare nuove tecniche per rivelare i bassi livelli di = virus=20 coinvolto=94!
Le = incompatibilit=E0=20 logiche dei risultati sono macroscopiche ed=20 evidenti.
a) Vi =E8 infatti mancanza di = correlazione tra=20 p24 e tecniche di amplificazione genica. (Abbiamo gi=E0 menzionato = il fatto=20 che la p24 =E8 considerata =93prova diretta di identificazione=20 dell=92HIV=94).
Nessuna=20 correlazione venne trovata tra il livello di p24 e la=20 RT-PCR.
La determinazione della carica = virale era=20 altamente sensibile quando paragonata alla misurazione della p24 = (pi=F9 del=20 95% dei pazienti aveva un carico virale rilevabile mentre solo il = 40 %=20 aveva una p24 rilevabile), ma nei campioni positivi il livello di = antigene=20 e del carico virale aveva una significativit=E0 solamente=20 borderline.
b)Nessuna=20 correlazione venne osservata tra il carico virale=20 = quanti           &= nbsp;  =20 ficato con la NASBA o con Amplicor e la concentrazione con = l=92antigene=20 p24.
Nessuna correlazione fu osservata = tra la dose=20 infettiva, la carica virale determinata con NASBA o con = l=92Amplicor=20 (RT-PCR).
c) Vi =E8 mancanza di correlazione = anche tra=20 RT-PCR ed altri test.
In = uno studio su=20 soggetti vaccinati, un gruppo di quattro campioni di siero = risultarono=20 positivi alla RT PCR durante un periodo di 11 mesi, incluso un = risultato=20 di circa 10<+>4 -105 copie /mL, ed un quinto risultato = positivo un=20 anno dopo in un soggetto vaccinato, ma =93non infetto=94. Per = questo, gli=20 stessi autori avanzarono =93dubbi riguardanti la specificit=E0 = della misura=20 del HIV RNA quale standard aureo per lo screening e la conferma=20 dell=92infezione=94.
d) Vi = =E8 infine=20 mancanza di correlazione tra =93virus=94 e =93carica=20 virale=94.
1) Secondo Piatiak, l=92alto = livello di =93virus=94=20 nel plasma era 999 per mille =93non = coltivabile=94. =20
2) Ho et=20 al. hanno dimostrato che 10.000 =93virioni=94 plasmatici contati = con la PCR=20 ramificata corrispondono a meno di un virus =93infettivo=94 per ml = 64.
3) In un pi=F9 recente studio di = Ho si pu=F2=20 constatareare che ad una carica di 500.000 unit=E0 (!) = corrispondevano 0=20 (zero!) =93virus coltivati=94. Secondo i dati riportati, al = paziente 105 prima=20 della cura (con Ritonavir) erano stati riscontrati 643.000 = =93virioni=94/ml,=20 il cui numero =E8 stato calcolato con il branched DNA assay ad = esso=20 corrispondevano pi=F9 di 1.000 TCID- 50/ml (50% tissue colture = infectious=20 doses). Dopo due giorni di terapia e nei giorni seguenti il = =93virus=20 coltivabile=94 era 0 (zero). Nel contempo, ai giorni 2, 3 e 4 i = =93virioni=20 liberi=94 (ovvero la cosiddetta =93carica virale=94) restava = superiore a=20 500.000. Fino al giorno 7 i =93virioni=94 erano ancora superiori a = 100.000.
Un = virione =E8=20 definito come una particella virale completa costituita = dall=92acido=20 nucleico virale, dal capside e dal pericapside (quando presente). = La=20 possibile obiezione che un virione difettivo venga =93visto=94 dal = branched=20 DNA assay, ma non venga rilevato dai saggi colturali, non risolve = il=20 problema della mancata corrispondenza con gli altri test e con=20 l=92impossibilit=E0 di vedere queste particelle al microscopio = direttamente=20 dai tessuti del paziente, senza passaggi=20 colturali.
Fosse = stato cos=EC,=20 Gallo non avrebbe avuto bisogno di ricorrere a frodi, non avrebbe = avuto=20 bisogno di tre anni di indefesse ricerche per trovare qualcosa che = avesse=20 l=92aspetto di un virus. Ci sarebbe arrivato immediatamente = assieme ad altri=20 ricercatori.
Mark = Craddock,=20 professore della School of Mathematics and Statistics, The=20 University of Sydney, Australia ha commentato: =93Cos=92=E8 questa = grande=20 viremia di miliardi di particelle di RNA che possono essere visti=20 solamente con una tecnica non documentata (branched-DNA) o la PCR = ma non=20 con test funzionale di = infettivit=E0=94? =20

<LOR=20 "IL GENOMA=20 = VIRALE          = =20
Come gi=E0=20 detto, le tecniche di amplificazione genica riguardano piccole = frazioni,=20 non l=92intero genoma =93virale=94 ed i risultati ottenuti non = danno la=20 sicurezza di trovarsi di fronte all=92HIV, tanto pi=F9 che sono = francamente=20 discordanti. A questo punto =E8 perci=F2 legittimo domandarsi qual = =E8 veramente=20 e com=92=E8 fatto l=92originale genoma = virale. =20
Innanzitutto il gruppo di ricercatori di Perth osserva = che "se ci=20 fosse un singolo retrovirus dell=92AIDS, un unico retrovirus, = allora le=20 differenze genomiche inferiori all=921% dovrebbero essere la = regola, non=20 l=92eccezione.
Per = esempio, il=20 vaccino al poliovirus Sabin del tipo 3 differiva dal suo = progenitore=20 neurovirulento in solo 10 posizioni nucleotidiche dopo 53 passaggi = in=20 vitro e 21 in vivo nei tessuti di scimmie. Nel 1977, l=92influenza = virale A=20 H1N1 riapparve nella popolazione umana dopo 27 anni di = inattivit=E0 con=20 sequenze principalmente identiche a quelle del virus del=20 1950".
Sebbene si sia=20 usato il modello della quasispecie di Eigen per descrivere il = genoma dei=20 virus dell=92RNA, differenze di sequenza anche dell=921% in questi = genomi=20 vengono considerate rappresentare =93estrema variabilit=E0=94=94. = =93Molte forze=20 selettive possono stabilizzare le popolazioni=20 virali.
Questi fattori=20 stabilizzanti possono racchiudere la necessit=E0 della = conservazione della=20 struttura e della funzione delle proteine, una struttura = secondaria=20 dell=92RNA, siti di glicosilazione e siti di=20 fosforilazione.
Vediamo ora qual =E8=20 il quadro offerto dalla ricerca = sull=92HIV.  =20
Fu presto=20 scoperto che =93se si testassero due sieropositivi a caso e si = analizzasse=20 il materiale genetico del ceppo di uno e dell=92altro, essi = differirebbero,=20 in media, di circa il 13%=94. Inoltre, quello che viene = considerato il=20 genotipo dell=92HIV deriva dalle analisi di sequenza di subgenomi = che=20 misurano dal 2% al 30% del totale. Il dato sconcertante =E8 che = tali=20 =93genomi=94 variano fino al 40%.   =
=93Se = il 30% del=20 genoma dell=92HIV varia fino al 40%, di quanto varia il 100% del = genoma=20 dell=92HIV?=94 =E8 la legittima domanda della Eleopulos e=20 coll.
Non = c=92=E8 accordo tra=20 gli studiosi sul numero di geni = dell=92HIV. =20
Nel=20 1988 si diceva che il genoma dell=92HIV consisteva in 8 = geni, nel 1990=20 in dieci. Nel 1996 Montagnier ha riferito che l=92HIV possiede = otto geni e=20 secondo Barr=E9-Sinoussi, l=92HIV ha nove = geni. =20
Nemmeno=20 il numero dei nucleotidi nel =93genoma dell=92HIV=94 sembra=20 costante.  =20

Le quasi=20 specie =20

Poich=E9=20 venivano riscontrate grandi differenze genomiche - persino = nello=20 stesso individuo albergherebbero almeno 10<+>6 -10=20 8
   =
=93varianti=20 genotipiche=94
- per = tentare di=20 giustificare tale fenomeno =E8 stato introdotto il concetto di=20 =93quasi-specie=94.
Prima = degli anni=20 =9290, le sequenze dell=92HIV erano classificate come = europee/statunitensi con=20 differenze della sequenza del 20-30% tra questi due=20 gruppi.
Negli = anni =9290, i=20 ricercatori dell=92HIV hanno cominciato a dividere il genoma HIV = nei=20 sottotipi A, B, C, D, E, etc.   =
La = base di questo=20 sistema di classificazione =E8: =93(a) i sottotipi sono = approssimativamente=20 equidistanti uno dall=92altro nel gene env; (b) l=92albero = filogenetico=20 env =E8 per la gran parte congruente con l=92albero filogenetico = gag; (c) due=20 o pi=F9 campioni sono richiesti per definire un sottotipo di=20 sequenza".
Tuttavia, =93Sono=20 sorti dei problemi nel nominare i sottotipi. Un numero piccolo ma = non=20 insignificante di sequenze virali sono ibride, ovvero si possono = riunire,=20 per esempio un sottotipo di sequenza del gag diventa problematico = quando=20 sorgono forme altamente divergenti di un dato sottotipo: tali = forme sono=20 talvolta designate come A=92, B=92, F=92, ecc. E=92 sempre pi=F9 = necessario avere=20 dei dati che codificano le sequenze sia del gag che dell=92env = quando si sta=20 rivendicando una nuova forma o=20 sottotipo=94.
Verso = la met=E0 del=20 1996 erano stati descritti =93almeno dieci=94(A-J) genotipi = dell=92HIV-I=20 principali (M) prevalenti e quelli a bassa prevalenza (O) e nuovi = genotipi=20 vengono ancora segnalati.
E=92 = quindi possibile=20 descrivere i =93DNA dell=92HIV=94, anche se hanno una variazione = del 10%, per=20 non menzionare il 20 o il 30 o il 40%, come una =93popolazione di = genomi=20 strettamente imparentati, e riferirsi ad essi come a=20 quasispecie=94?
L=92estrema=20 variabilit=E0 del genoma dell=92HIV induce a chiedersi che senso = abbia=20 riferirsi all=92HIV come ad una entit=E0 dalla precisa fisionomia. = La=20 differenza genomica tra uomini di razza diversa si aggira attorno = all=921=20 per 1.000, tra uomo ed orango-tan al 2%, ma per trovare una = differenza del=20 30%, bisogna confrontare nientemeno che uomo e topo, uomo e asino, = uomo ed=20 elefante! Possono correttamente ritenersi il topo e l=92asino e = l=92elefante=20 quasi-specie dell=92uomo (fig. 5)? =20

PARTICLE=20 DETECTION (identificazione di = particelle) =20
I=20 Retrovirus sono definiti come particelle con rivestimento di circa = 100-120nM di diametro con un core che comprende un involucro = proteico e un=20 complesso di ribonucleoproteina. =20
I=20 Retrovirus sono classificati in tre sottofamiglie: Spumavirinae,=20 Lentivirinae and Oncovirinae.
I = Retrovirus=20 appartenenti all=92ultima sottofamiglia sono divisi in particelle = di tipo A,=20 B, C e D.
A quale di questi debba = appartenere l=92HIV, non=20 =E8 ben chiaro. Secondo Gallo nel 1984 si trattava di una = particella di tipo=20 C, ma nel 1985 ammetteva che poteva essere anche del tipo=20 D.
Montagnier e colleghi riportarono = inizialmente=20 che era una particella di tipo C, quindi di tipo D, e quindi un=20 lentivirus, ovvero di un=92altra sottofamiglia. Secondo Munn ed = altri il=20 virus dell=92AIDS presenta caratteristiche del tipo C, del tipo D = e dei=20 lentivirus. Fauci ed altri descrissero l=92HIV in colture=20 monocitarie/macrofagiche come particelle retrovirali con = caratteristiche=20 di tipo A.
L=92HIV pare assumere = un=92identit=E0 cos=EC=20 imprecisa, cangiante, da aggiungere ulteriori motivi di=20 perplessit=E0. =20

FOTOGRAFIE         = ;   =20
Diversi=20 ricercatori nel campo dell=92AIDS hanno presentato=20 = foto           &nb= sp;  =20 grafie del virus HIV, ma quelle che si vedono sono solo particelle = similvirali indistinguibili da microvescicole cellulari normali. = Queste=20 particelle, in contrasto con i virus, sono molto instabili quando = rimosse=20 dal loro contesto, ed =E8 difficile isolarle e fotografarle in uno = stato di=20 vero isolamento.
Viceversa i virus=20 sono stabili perch=E9 essi devono lasciare di nuovo le cellule o = gli=20 organismi parassitati. L=92uso di tecniche di centrifugazione non=20 costituisce un problema per separare i virus dai vari contaminanti = ed=20 ottenere cos=EC il loro isolamento - quindi fotografarli, quindi = evidenziare=20 le loro proteine ed i loro costituenti genetici in modo=20 diretto.
I virus veri sono cos=EC stabili = che =E8 facile=20 fotografarli direttamente come particelle tridimensionali nel = microscopio=20 elettronico a scansione senza che sia necessario fissarli prima=20 chimicamente.
All=92opposto, le=20 microvescicole sono cos=EC instabili che esse possono essere = fotografate=20 solo con un microscopio elettronico a=20 = trasmis           =    =20 sione, che richiede che siano fissate chimicamente in sezioni = molto=20 sottili. Tutto ci=F2 che =E8 stato mostrato al mondo intero come = micrografie=20 dell=92HIV sono sezioni ultrasottili che includono particelle=20 indistinguibili da quelle cellulari (vedi figg.=20 6-8).
          &nb= sp;         =
LA PROVA=20 DELL'(IN)ESISTENZA=20 = DELL'HIV           = ; =20
Una=20 importantissima conferma alle argomentate critiche dei ricercatori = di=20 Perth =E8 arrivata nel marzo del 1997: due gruppi, uno = franco/tedesco e uno=20 del National Cancer Institute statunitense, hanno finalmente = pubblicato le=20 fotografie dei gradienti di densit=E0 in cui doveva essere = presente il virus=20 HIV isolato, puro (fig. 9).   =
Questo dato avrebbe=20 dovuto essere disponibile fin dal momento della scoperta del virus = (1983-84), ma nessuno prima l=92aveva fatto. Ed il motivo pi=F9 = verosimile =E8=20 che manca totalmente la corrispondenza tra quello che era = riscontrato e=20 quello che avrebbe dovuto esserci. =
Nello = studio=20 franco/tedesco le fotografie provengono dalla banda 1,16=20 gm/ml.
E=92 = impossibile dire=20 da quale densit=E0 provengono le fotografie dello studio = americano, ma=20 presumibilmente =E8 anch=92essa corrispondente a 1,16 gm/ml (dove = si ritrovano=20 i retrovirus).
La = Eleopulos et al.=20 rilevano che =93gli autori di entrambe le pubblicazioni ammettono = che le=20 particelle che sono presenti nel materiale della banda di = gradiente e che=20 sono definiti HIV rappresentano solo una frazione molto = piccola del=20 materiale totale. Gelderblom et al. affermano che il materiale = contiene un=20 eccesso di vescicole cellulari con una dimensione di 50-500 nM, = come=20 opposte ad una popolazione minore di particelle virali ... = le=20 vescicole cellulari sembrano essere il maggiore contaminante delle = preparazioni di HIV arricchite dalla centrifugazione in gradiente = di=20 sucrosio=94.
=93Riguardo il piccolo numero di = particelle=20 considerate HIV non c=92=E8 nessuna prova che lo siano=20 veramente.
Al=20 contrario:
(a) = le particelle=20 non sembrano avere estroflessioni superficiali. In altri lavori = pubblicati=20 da diversi ricercatori, incluso Gelderblom e i suoi colleghi viene = espressamente notata l=92assenza di queste=20 proiezioni;
(b) = le particelle=20 riferite come HIV non sono sferiche ed hanno diametri superiori a=20 100-120nM. Nella fotografia al microscopio elettronico di = Gluschankof e=20 coll., ci sono frecce che puntano a 5 =93virioni=94 senza = proiezioni=20 superficiali, le cui dimensioni sono: 121 X 145; 121 X 169; = 121 X=20 145, 121 X 145 e 133 X 145 nM. =
Nello = studio di=20 Bess e coll. sono indicate un totale di sei particelle di HIV, = anch=92esse=20 prive di proiezioni di superficie, le cui dimensioni sono 160 X = 240; 200 X=20 240; 280 X 280; 208 X 250; 167 X 250 and 250 X 292 and=20 nM.=94
=93In realt=E0, essi sostengono = che quelle sono=20 particelle dell=92HIV, ma senza fornire nessuna=20 prova.
Nel = materiale di=20 quella banda di densit=E0 dovrebbero esserci moltissime particelle = virali,=20 invece ne sono indicate solo alcune, in mezzo a molte=20 impurit=E0.
Queste particelle=20 hanno solo una vaga rassomiglianza con quelle che dovrebbero = essere delle=20 particelle retrovirali=94.
=93Il = punto=20 fondamentale =E8 che ogni genuina particella retrovirale dovrebbe = contenere=20 la stessa quantit=E0 di RNA e proteine, n=E9 pi=F9 n=E9 meno. = Questo significa che=20 se noi consideriamo i diametri delle particelle indicate nei due = studi=20 citati, essi sono da 1,14 a 1,96 volte pi=F9 grandi del massimo = previsto per=20 il normale HIV. Traducendo questo in volumi, e confrontando con = una=20 particella con diametro di 120nM, le particelle franco/tedesche = hanno un=20 volume 50% maggiore, quelle statunitensi uno 750% maggiore=94, = ovvero=20 incompatibile con la difinizione di = retrovirus! =20
Anche se=20 non =E8 ammesso dagli autori, i dati dei due lavori citati = contribuiscono a=20 dimostrare che l=E0 dove doveva essere presente l=92HIV puro, = dell=92HIV non c=92=E8=20 traccia.
          &nb= sp;         =
CONCLUSIONI =20

Nessuno=20 dei test esaminati appare sufficientemente sicuro per individuare=20 un=92infezione da HIV. Paradossalmente neppure la = =93determinazione diretta=20 del virus=94 =E8 in grado di rispondere allo stesso quesito, tanto = =E8 vero che=20 vi =E8 una inconciliabile discordanza dei risultati ottenuti con = le varie=20 metodiche che ne vengono perci=F2=20 invalidati.
In = pi=F9 non risulta=20 dimostrata l=92esistenza di un=92entit=E0 che possa = ragionevolmente chiamarsi=20 =93il virus HIV=94, sia nelle sue componenti proteiche, sia nel = genoma, sia=20 come particella fisica. Il vero significato dei test =E8 meglio = compreso se=20 viene esaminata la loro origine. =
Per = provare=20 l=92esistenza di un nuovo virus sia il gruppo di Montagnier nel = 1983 che=20 quello di Gallo nel 1984 separarono il sopranatante di colture = ritenute=20 infette in gradienti di densit=E0. Considerarono - erroneamente - = che il=20 materiale che si separava al livello di 1,16 mg/ml fosse = costituito da=20 =93pure particelle di HIV=94.   =
Le = proteine=20 presenti in questa banda e che sono reattive con i sieri di = pazienti con=20 AIDS (ma non solo con i loro sieri) furono considerate proteine = dell=92HIV.=20 Ugualmente, una particolare frazione di RNA ritrovata nella = medesima banda=20 di separazione fu considerata il genoma del nuovo virus. Da = allora, alcune=20 di queste proteine sono usate per ricavare i reattivi per alcuni = test o=20 come immunogeni per produrre negli animali di laboratorio gli = anticorpi=20 utilizzati per altri test (un procedimento simile venne seguito = con certi=20 frammenti di RNA). A questo punto la spiegazione degli esperimenti = di=20 Gallo effettuati nel 1984 appare pi=F9 chiara: utilizz=F2 un = miscuglio di=20 proteine (ritenute virali ma in realt=E0 cellulari) per = immunizzare i=20 conigli ed ottenere cos=EC un siero che ovviamente reagiva con le = stesse=20 proteine presenti nelle colture da cui=20 proveniva.
In = altre parole=20 Gallo ha creduto di dimostrare la sua ipotesi (l=92esistenza del = virus) con=20 altre ipotesi rivelatesi errate (che l=92attivit=E0 = transcriptasica inversa,=20 la presenza di particelle similvirali, gli anticorpi in quel modo = trovati=20 fossero specifici per il virus).  =20
Cos=EC sono=20 nati i test che ancora oggi vengono utilizzati e perfezionati per = porre=20 una diagnosi cos=EC impegnativa. =
Una = importante=20 prova della correttezza di questa interpretazione dei fatti sta = nei=20 risultati che vennero ottenuti su topi e scimmie nel 1991. In = questi=20 studi, allo scopo di valutare un potenziale vaccino, alcuni = animali di=20 laboratorio vennero iniettati con componenti cellulari da colture = non=20 infette con l=92HIV: i risultati furono simili a quelli ottenuti = con il=20 =93vaccino vero e proprio=94 (cio=E9 con =93virus da colture=20 infette=94).
Nessuna differenza=20 significativa venne rilevata, tanto che il commento perfettamente=20 appropriato ed ancora attuale di John Maddox fu: =93la ricerca = sull=92AIDS si=20 =E8 capovolta=94.
In = altre parole,=20 per aver ottenuto quei risultati non c=92era alcun bisogno di = ipotizzare la=20 presenza di un virus HIV. =20

Fabio Franchi   =
Specialista in=20 Igiene,
Medicina=20 Preventiva
e in = Malattie=20 Infettive
Trieste

Fig.=20 1

Fig.=20 2

Fig.=20 3

Fig.=20 4

Fig.=20 5

=20

Leadership = Medica^=AE

=20

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